一、培养基的制备常见问题及原因分析

培养基的配制是微生物实验人员的基本技能之一，适宜的培养基制备方法、选择正确的灭菌方式、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证，在制备培养基的过程中，可能会遇到以下几种问题：

1、培养基不能凝固

（1）制备过程中过度加热。

（2）低pH造成培养基酸解。

（3）称量不正确琼脂未完全溶解。

（4）培养基成分未充分混匀。

2、pH不正确

（1）制备过程中过度加热。

（2）水质不佳。

（3）外部化学物质污染。

（4）测定是温度不正确。

（5）pH计为正确校准。

（6）脱水培养基质量差。

3、颜色异常

（1）制备过程过度加热。

（2）水质不佳。

（3）pH不正确。

（4）外来污染。

（5）脱水培养基质量差。

4、产生沉淀

（1）制备过程过度加热。

（2）水质不佳。

（3）pH不正确。

（4）原料中的杂质。

（5）脱水培养基质量差。

5、培养基出现抑制/低生长率

（1）制备过程过度加热。

（2）水质不佳。

（3）脱水培养基质量差。

（4）使用成分不正确，添加剂用量不正确。

（5）容器或水中的有毒残留物。

6、选择性差

（1）制备过程过度加热。

（2）脱水培养基质量差。

（3）配方使用不对。

（4）添加成分不正确，例如添加成分是培养基过热、添加浓度错误等。

7、污染

（1）无菌操作存在问题。

（2）添加剂污染。

（3）不适当灭菌

二、制备培养基如何减少失败率

制备培养基的时候，因为操作不当可能会出现各种问题，导致制备失败，为了减少失败率，制备培养基时要注意：

1、选择合适的培养基配方

同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外，一般均应尽量收集有关资料，加以比较核对，再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。

2、培养基成分的称取要精确

培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后，还应进行一次检查。

3、培养基各成分的混合和溶化要注意

培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化，也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化。

4、调整好pH

培养基各成分完全溶解后，应进行pH的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低pH0.2。而肠浸液pH却会有显著的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH，保证培养基的质量。pH调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。