一、培养基配好后为什么必须立即灭菌

培养基配好后，必须要马上进行灭菌处理，这是为什么呢？

之所以培养基配好就要灭菌，是因为未灭菌的刚刚配置好的培养基是暴露在环境中的，可能染上环境中的大量细菌，而培养基也是这些细菌生长所需要的良好条件；如果不及时灭菌，会导致在环境中染上的细菌大量繁殖，消耗培养基中的营养成分，甚至产生有害物质，造成培养基灭菌后也不能使用。

二、如何检查灭菌后的培养基是否为无菌

灭菌后，如果要求比较严格，必须是无菌培养基的话，可以进行无菌试验，具体的方法是：

将已经灭完菌的菌棒放到25－28℃的恒温环境中避光培养3天后，拿出来检查看袋内有没有杂菌滋生的痕迹，看菌袋内有没没有导演变色、出现斑点等情况的发生，如果有就证明灭菌不彻底。

三、影响培养基灭菌效果的因素有哪些

培养基灭菌要求要彻底，不彻底的话可能影响微生物的培养，一般影响培养基灭菌效果的因素主要有：

1、营养成分的保持

湿热灭菌时，微生物被杀死的同时，培养基的营养成分也遭到了一定的破坏，特别是氨基酸和维生素。如在121℃，仅20min，就有59%的赖氨酸和精氨酸及其他碱性氨基酸被破坏，蛋氨酸和色氨酸也有相当数量被破坏。在热的作用下某些营养成分还可能因受热而相互之间发生反应，造成培养基中原有营养成分的数量变化，因而影响培养基质量。

2、微生物的耐热性

细菌芽孢的热阻较大，灭菌所需要的时间取决于把细菌芽孢减少到所规定数目的时间。

3、pH值

pH值对微生物的耐热性影响很大。pH值介于6.0~8.0时，微生物最不易死亡。pH<6.0时，微生物比较容易死亡，此时H+很容易渗入微生物的细胞，从而改变细胞的生理反应，促使其死亡。所以培养基的pH越低，所需的时间也越短。

4、培养基成分

油脂、糖类及蛋白质等组成的高浓度有机物会包于细胞的周围形式一层薄膜、影响热的传导。而高浓度的盐类、色素则削弱其耐热性，灭菌较易。例如：大肠杆菌在水中加热至60-65℃便死亡，在10%糖液中需70℃加热4-6分钟才死亡，在30%糖液中需30分钟才死亡。一般糖类含量较多的时候最好选用115℃，30分钟；一般的培养基可选择121℃20分钟。

5、泡沫

泡沫中的空气形成隔热层，使热量难以渗透进去，杀死其中的杂菌。

6、颗粒

颗粒小，容易灭菌，颗粒大，则难灭菌。对于含有少量较大颗粒及粗纤维的培养基，可用粗滤的方法（不应影响培养基质量）予以除去，培养基结块会造成培养基灭菌的不彻底。

8、灭菌锅内空气是否排净

这个是影响灭菌是温度和压力比例关系的要点，同样达到了相同的压力的情况下，如果空气未能排净，也就是说不是纯蒸汽灭菌，此时的温度不一定能达到目的要求，会严重影响灭菌效果。