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常用的细胞培养基有哪些 细胞培养基的品质要求

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摘要:培养基除了培养微生物外,细胞也是可以用培养基培养的,常用的细胞培养基主要有MEM培养基、DMEM培养基、IMDM培养基、Ham 's F-12K培养基、DMEM/F12培养基、McCoy’s 5A培养基、RPMI-1640培养基、L15培养基等多种,不管是哪种细胞培养基,一般在品质方面需要满足外观、溶解性、pH值、水分、冰点渗透压等方面的要求。下面一起来了解一下常用的细胞培养基有哪些以及细胞培养基的品质要求吧。

一、什么是细胞培养基

细胞培养基是培养细胞的培养基,既是供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质,也是培养细胞生长和繁殖的生存环境,一般是盐、碳水化合物、维生素、氨基酸、代谢前体、生长因子、激素和微量元素的复杂混合物。

二、常用的细胞培养基有哪些

细胞培养基的种类众多,由于不同细胞系对这些成分的要求各不相同,因此产生了不同类型的培养基,常用的细胞培养基主要有:

1、MEM培养基

是一种添加了营养物的最低必需培养基,仅含有12种必需氨基酸、L-谷氨酰胺和8种维生素,含糖量为1g/L。MEM是一种最基础、最常用的细胞培养基,主要应用于贴壁细胞的培养,在添加血清后,可用于培养多种单层生长的细胞,如成纤维细胞。修改配方后的a-MEM则可广泛应用于各种哺乳动物悬浮和贴壁细胞培养。

2、DMEM培养基

氨基酸含量是MEM的两倍,维生素含量是MEM的4倍,以及硝酸铁、丙酮酸钠和一些补充氨基酸。此外,DMEM分为低糖型和高糖型,葡萄糖含量分别为1g/L和4.5g/L。(低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养;高糖更适合高密度悬浮细胞培养,也适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。)

3、IMDM培养基

用于淋巴细胞和杂交瘤细胞的生长。与DMEM相比,添加了HEPES和硒,硝酸钾取代了硝酸铁,并且含有更多的氨基酸、维生素和无机盐。

4、Ham 's F-12K培养基

用于支持原代细胞的生长和分化。F-12K增加了氨基酸、丙酮酸、生物素、钙、镁、腐胺和酚红的含量。

5、DMEM/F12培养基

DMEM和F12的1:1混合物,能够在低血清条件下支持多种哺乳动物细胞的培养,在此培养基中成功培养的细胞包括:MDCK、神经胶质细胞、成纤维细胞和人内皮细胞等。

6、McCoy’s 5A培养基

广泛用于多种原代细胞及细胞系的培养,如来源于骨髓、皮肤、脾脏、肾脏和肺等组织的哺乳动物原代细胞。

7、RPMI-1640培养基

是在McCoy’5A的基础上进行改良研发出的,最初用于人白血病细胞的悬浮培养,后来发现也适用于HeLa、MCF-7、PC12、外周血单核细胞(B/T淋巴细胞)和星形细胞的培养。RPMI 1640与其它培养基的区别是含有还原型谷胱甘肽和高浓度维生素。此外还含有含有MEM、DMEM中不含的生物素、维生素B12和对氨基苯。

8、L15培养基

L-15培养基的配方中不含用于CO2平衡环境的碳酸盐缓冲系统, 而是用磷酸盐、L-精氨酸、L-组氨酸和 L-半胱氨酸作为缓冲剂。用半乳糖和丙酮酸钠代替葡萄糖以防止乳酸的形成。可以在无CO2培养箱中进行细胞培养,或者拧紧瓶盖培养。

三、细胞培养基的品质要求

细胞培养基有多种,不同种类的细胞培养基用于培养不同细胞,一般来说,好的细胞培养基,需要满足以下几点要求:

1、外观

颜色、粉末细度须均匀。

2、溶解性

培养基完全溶解,可以避免培养基内营养成分的流失。

3、pH值

哺乳类动物细胞生长需要合适的酸碱度,同时pH值的测定也可以检查培养基的批间差异。

4、水分

培养基的营养成份很丰富,利于微生物的滋长,因此水分的含量控制可以延长有效期。

5、冰点渗透压

细胞必须生活在合适的渗透压环境中,同时渗透压值的测定也可以检查培养基的批间差异。

6、菌落总数

粉末培养基不是无菌制剂,培养基本身的营养成分很丰富,容易滋生微生物,因此菌落的控制可以延长有效期

7、细胞生长试验

可检查细胞培养基是否有促生长的能力,以及是否有不利细胞生长的毒素。

8、细菌内毒素

为满足生物制品细菌内毒素的控制要求,作为生物制品生产原料的培养基同样需要细菌内毒素控制。

9、稳定性

确定产品的储存、运输条件,产品的保质期限。

10、一致性

验证产品的均一性。

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